酶联免疫斑点技术(Elispot)特点:酶联免疫斑点技术Elispot(Enzyme-linkedImmunospotAssay)。结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术(ELISA),能够在单细胞水平检测细胞因子的分泌情况。实验设计在96孔培养板上进行,直接以培养板的塑料板底或者PVDF膜以及硝酸纤维素膜为基质,包被上特异性的单克隆抗体,用以捕获细胞分泌的细胞因子。(由于涉及到细胞培养的过程,对单克隆抗体的要求要远高于ELISA中的捕获抗体,该抗体需要无毒,亲和力高等特点。)之后,在培养板的孔内加入细胞培养基(现在无血清ELISPOT技术已经成熟,培养基中可以不再含有血清)、待检测的细胞以及抗原刺激物进行培养。LabEx抗体芯片主要用于蛋白表达谱、蛋白质磷酸化及蛋白质相互作用等检测。ARY003C检测服务
免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些?1)、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不知抗体是进口的还是国产的工作液,怎么这么高稀释度也没能做出阳性结果?另外,不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果,抗原抗体反应有前带和后带效应,必须摸索比较好浓度。2)、抗原修复不全,对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位,以利于与抗体结合;建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验,这是比较好的时间和次数。若不行,还可高压修复。3)、组织切片本身这种抗原含量低;4)、血清封闭时间过长。5)、DAB孵育时间过短。6)、细胞通透不全,抗体未能充分进入胞内参与反应。7)、开始做免疫组化,我建议你一定要首先做个阳性对照片,排除抗体等外的方法问题。IL-3 elisa kit检测服务LabEx可以提供包括MSD、Luminex、CBA以及抗体芯片在内的多因子检测服务。
基于流式平台CBA:CBA(CytometricBeadArray),即微量样本多指标流式蛋白定量技术是一个基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法,它能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。CBA的原理通过利用一系列带有荧光标记的微小、分散的微球连接特定的捕获抗体以捕捉溶液系统中的待测物,通过对应各种不同检测物的特异微球上所带有荧光强度不同从而同时测定分析样本中多种可溶性成分的数量。CBA的特点:1.能够同时对单个样本进行多种检测。2.较传统检测节省样本量9倍。3.灵敏度高、重复性好。4.所有分析只需一组标准曲线。5.避免酶联反应所致人工假象。6.节省操作和检测时间。
酶联免疫斑点技术(Elispot)技术优势(1)单细胞水平,活细胞功能检测:弥补了体液中CK半衰期短的不足,当体液中某CK含量较低时,用ELISPOT法检测具有较高灵敏性。(2)操作简便经济,可以进行高通量筛选:既可检测自发分泌细胞,又可检测抗原特异性CK分泌细胞,具有较高特异性,并可观察药物治疗反应,且使对CSF中T、B细胞研究成为可能,对神经免疫疾病发病机制研究及临床疗效观察均有重要价值。(3)灵敏度高:在一百万个阴性细胞中只要有一个分泌细胞因子的阳性细胞即可被检测出来。灵敏度比传统ELISA方法高2-3个数量级。LabEx提供蛋白水平检测服务!
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抗体芯片是将大量不同的抗原特异性结合的抗体有序地排列、固定于固相载体表面,形成微阵列。ARY003C检测服务
Q:样本保存要求和保存时间?A:保存要求:
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